Disoluciones y Diluciones

Disolución: mezcla homogénea, de composición uniforme, cuyos componentes no pueden distinguirse a simple vista ni con microscopio. Dilución: disolución menos concentrada que otra de partida; diluir es pasar una disolución concentrada a otra menos concentrada, con menos cantidad de soluto.

Sistemas Homogéneos o Disoluciones

Mezcla de 2 o más sustancias cuyos componentes no se separan por medios físicos.

Características de las Disoluciones:

• Se consideran formadas por una única fase.
• Sus propiedades son diferentes de las que tienen el disolvente puro (punto de ebullición, pueden variar pH y conductividad).
• A diferencia de las dispersiones, son sistemas muy estables.
• Los componentes de una disolución no se pueden separar por medios físicos, si se pueden separar mediante cambios en el estado de agregación como destilación.

Concentración de la Disolución

Cantidad de soluto que hay en una cantidad de disolución o disolvente.

Solubilidad

Forma de conocer la máxima cantidad de una sal que puede disolverse en agua para formar una solución.

Procedimiento de Preparación de Disoluciones

1. Preparar el material.
2. Cálculos.
3. Preparar el soluto y disolvente.
4. Mezclar el soluto en el disolvente.
5. Enrasar.
6. Homogeneizar.
7. Envasar y etiquetar.

Filtración

Dispositivo poroso, de diversa naturaleza, que permite el paso del líquido y retiene partículas con tamaño superior al tamaño del poro. Hay filtro circular (alemán) y de pliegues (francés).

Los Filtros de Membrana

Tienen forma de disco y están fabricados con acetato o nitrato de celulosa.

Tipos de Filtración

• Por gravedad: utiliza la fuerza gravitatoria para hacer pasar el líquido a través de un embudo con filtro y obtener la separación.
• Por vacío o presión reducida: requiere de una bomba de vacío, creando el vacío se fuerza a que la disolución pase velozmente a través del filtro, es una filtración más rápida que por gravedad.
• *Con pipeta Pasteur o con filtros adaptados: se utiliza para pequeñas cantidades de líquido.

Decantación

Método mecánico de separación de mezclas heterogéneas de sólidos-líquidos (suspensión) o líquido-líquido (emulsión) en función de la densidad de sus componentes por acción de la gravedad.

Precipitación

Proceso de obtención de un sólido a partir de una disolución.

Centrifugación

Método mecánico de separación de mezclas heterogéneas sólido-líquido (suspensión) o líquido-líquido (emulsión) gracias a la acción de la fuerza centrífuga.

Componentes de la Centrífuga

• Rotor
• Motor
• Estabilizador
• Ventilador
• Cámara de vacío
• Refrigerador
• Freno
• Mecanismo de seguridad
• Tubos de centrífuga

Tipos de Centrífuga

• *Velocidad de rotación:
  • De sobremesa o de baja velocidad: (No sobrepasan una aceleración de 15.000 rpm).
  • De alta velocidad: (entre 15.000 – 25.000 rpm).
  • Ultracentrífugas: (Más de 30.000 rpm).
• *Su función:
  • Microcentrífugas: (de pequeño tamaño, pero alcanzan las velocidades más altas).
  • Citocentrífugas: (para acelerar la sedimentación de células sobre un portaobjetos).
  • Microcentrífuga: para centrifugar a alta velocidad un capilar con sangre total y obtener el hematocrito sanguíneo.

Técnicas de Centrifugación

• Analítica: menos habitual en un laboratorio de análisis clínicos. Con esta técnica determinamos las propiedades de las partículas.
• *Preparativa: más habitual en un laboratorio de análisis clínicos. Permite aislar las partículas para posteriormente trabajar con ellas. Hay 2 tipos:
  • Básica: el tubo se llena con muestra y se centrifuga.
  • Diferencial o frontera móvil: separación de los componentes de una célula, principalmente de orgánulos.

Electroforesis

Migración de moléculas en disolución cargadas, en forma de iones, a través de un campo eléctrico. La electroforesis es una técnica compleja que requiere varios pasos que es necesario conocer y poner en práctica correctamente para lograr buenas separaciones.

Componentes del Equipo de Electroforesis

• Fuente de alimentación eléctrica.
• Cubeta.
• Soporte.

pH Ácido

Carga +.

pH Básico

Carga -.

Técnicas Electroforéticas

• *En geles de agarosa: separación de moléculas de ADN.
• *En gel de poliacrilamida en presencia de SDS: para separación de proteínas, fragmentos pequeños de ADN y ARN.
• *En acetato de celulosa o collogel: para realizar proteinogramas (método semicuantitativo de análisis de proteínas plasmáticas).

Pasos en Electroforesis en Acetato de Celulosa

1. Preparación.
2. Disposición de la alícuota sobre el soporte.
3. Electroforesis.
4. Revelado.
5. Lectura.

Técnicas Especiales

• *Isoelectroenfoque: variante de electroforesis en la que el gel (poliacrilamida) posee un gradiente de pH fijado en su estructura.
• *Electroforesis bidimensional: tras realizar una primera separación su resultado se somete a otra de diferente mecanismo en dirección perpendicular (la primera es un isoelectroenfoque en un gel cilíndrico estrecho y posteriormente el cilindro se coloca como muestra para una SDS-PAGE).
• *De campo pulsante: las moléculas o fragmentos de ADN de longitud superior a 20-40 kb no se pueden separar empleando la electroforesis convencional en gel de agarosa.
• Inmunoelectroforesis: combina con una electroforesis en geles de agarosa seguida de una inmunodifusión.
• Electroforesis capilar: utiliza como soporte un capilar de diámetro interno muy pequeño, dentro del capilar de separación se encuentra la disolución que contiene la mezcla de moléculas que queremos separar y el tampón encargado de conducir la corriente.