Preparación de Muestras de Tejido para Estudio e Investigación

Procesador de Tejidos

• Si la muestra viene directamente del pabellón, se puede colocar en la máquina. En cambio, si viene ya conservada por varios días, no se coloca.

Paso 1 y 2: Fijación por formalina al 10%.

Paso 8: Desde el paso 1 y 2. Contiene alcohol para deshidratar.

Paso 9 y 10: Saca el alcohol y hace compatible el tejido con parafina.

Paso 11 y 12: Se le agrega parafina en estado líquido a 56°C para rellenar los espacios en donde le sacamos agua y líquidos. Lo preparamos para la inclusión.

Inclusión de la Muestra

• Dispensador de parafina a una temperatura de 56-60°C donde se vierte en un molde de parafina obteniendo un bloque sólido apto para el corte.

Corte

• Se usa el micrótomo.
• Lo ideal es cortar el bloque con un grosor de 4 µm.
• Las lonjas de parafina salen arrugadas y por eso hay que tirarlas a un baño de flotación con agua destilada a 56°C. De esa forma se retira y se coloca en un portaobjetos, se deja secar a temperatura ambiente y se evapora el agua.

Tinción

• Consta de 18 pasos.
• Royal 1-2: Tratamiento con xilol por 5 minutos en cada uno. El xilol saca la parafina del tejido porque ya no la necesitan.
• Royal 3-4: Alcohol 100%, 5 minutos.
• Royal 5: Alcohol de 95%, 5 minutos.
• Royal 6: Alcohol al 70%, 5 minutos.

*El alcohol se agrega de forma descendente para hacerlo compatible con la tinción.

• Royal 7: Agua destilada. Para que no se dañe ni decolore durante la tinción producto del alcohol agregado anteriormente. 5 min.
• Royal 8: Hematoxilina. Dejar 4 minutos si se trata de una hematoxilina nueva, si es una antigua dejar 6 min.
• Royal 9: Agua corriente.
• Royal 10: Eosina durante 1-2 min.

*Hematoxilina: morada.

*Eosina: rojo – rosado.

• Royal 11: Sacar los excesos en agua destilada.
• Royal 12: Alcohol 70%.
• Royal 13: Alcohol 95%.
• Royal 14: Alcohol 95%.
• Royal 15: Alcohol 100%.
• Royal 16: Alcohol 100%.

*De esta forma se sacan los excesos.

• Royal 17: Lo mismo que el Royal 18.
• Royal 18: Se le agrega bálsamo de Canadá para hacer más compatible el tejido. Aunque es un pegamento no ideal ya que se coloca amarillento, se demora en secar y no es apto para una observación prolongada, igual se usa porque es más barato.

Hematoxilina

Tiñe estructuras ácidas. Se utiliza en histología para teñir los componentes aniónicos (ácidos) de los tejidos, a los que da una coloración violeta. Tiñe intensamente los núcleos de las células, dado que estos contienen ácidos nucleicos ricos en radicales ácidos.

Eosina

Es un compuesto ácido de polaridad negativa. Colorea compuestos y orgánulos citoplasmáticos, colágeno y fibras musculares pero no los núcleos (que son básicamente ácidos nucleicos y están cargados negativamente).

La coloración resultante de la tinción con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. Es fuertemente fluorescente, aunque esta característica es muy poco utilizada.

La eosina es un colorante muy usado en tinciones de vitalidad. Al ser un colorante aniónico (carga negativa) no penetra en el interior celular a no ser que la membrana sea permeable. Esto solo sucede en células muertas. Por tanto, en una tinción con eosina encontraremos células con el interior teñido (muertas) y células solo teñidas en su entorno (vivas).