Vacunas Antimicrobianas

Importancia

– La inmunidad puede prevenir o disminuir los síntomas graves de enfermedad al inhibir la propagación de una bacteria, un virus o una toxina.

– La vacunación de una población disminuye el número de personas susceptibles (inmunidad masiva).

Beneficios

– Protección de grupos de población de los síntomas de tos ferina, difteria, tétanos y rabia.

– Control de la propagación del sarampión, parotiditis, rubeola e infección por el virus Varicela Zoster, Haemophilus influenzae b y Streptococcus pneumoniae.

– Eliminación de la poliomielitis por virus de tipo salvaje y la viruela.

Tipos de Vacunación

Vacunación Pasiva

– Consiste en la inyección de anticuerpos purificados o de suero con anticuerpos para tratar o conferir una protección rápida o temporal a un sujeto.

   (RN por leche materna o traspaso desde placenta).

Vacunación Activa

– La que aparece cuando se estimula una respuesta inmunitaria, como resultado de la exposición a un inmunógeno, sea un agente infeccioso (vacunación natural) o mediante una exposición forzada a microorganismos o a sus antígenos con vacuna.

Vacunas Inactivadas

Características

– Emplean una gran cantidad de antígeno, para conseguir una respuesta inmune humoral protectora.

– Se pueden obtener por inactivación química (formol) o térmica de las bacterias, las toxinas bacterianas o los virus.

– Mediante la purificación o síntesis de los componentes o las subunidades de los agentes infecciosos.

– Ej: Poliomielitis, Hep. A, Gripe y Rabia.

– Son más usadas que las atenuadas, especialmente porque hay microorganismos donde no se puede llevar a cabo el proceso de atenuación.

– Son seguras en general, salvo cuando los inoculados presentan alergias a sus componentes.

– Se suelen administrar con un adyuvante para reforzar su inmunogenicidad. Esto estimula su captación, por las CD y los macrófagos.

• La precipitación sobre alumbre es una de las formas más usadas.
• MF59 (escualeno microfluidificado en una emulsión de aceite y agua)
• MFL (monofosforil lípido A)
• Emulsiones, partículas parecidas a virus, liposomas, componentes de la pared bacteriana y surfactantes poliméricos.

Desventajas

– No consiguen inmunidad de por vida.

– Inmunidad solamente humoral, sin participación de componente celular.

– No provoca una respuesta local de IgA.

– Es preciso administrar dosis de recuerdo.

– Se deben utilizar dosis mayores.

Vacunas Atenuadas

Características

– Se preparan con microorganismos dotados de una escasa capacidad de provocar enfermedad.

– Especialmente útiles para conferir protección contra los virus con envoltura (Linf. T).

– En general, activa el proceso inmunitario pasando por las respuestas humoral, celular y de memoria.

– Su inmunidad suele persistir de por vida.

Desventajas

– El virus vacunal puede resultar peligroso en inmunodeprimidos o embarazadas.

– La vacuna puede convertirse en una forma vírica virulenta.

– Es preciso mantener la viabilidad de la vacuna.

– Provienen de virus de tipo salvaje, virus perteneciente a otras especies con la que comparten determinantes antigénicos o virus no virulentos obtenidos por ingeniería genética.

Vacunas del Futuro

– Creadas por ingeniería genética, permiten introducir mutaciones capaces de inactivar o producir la eliminación de un gen virulento.

– Los genes de agentes infecciosos no susceptibles de atenuación se pueden introducir en virus seguros para generar vacunas de virus híbridos.

– Vacunas de subunidades obtenidas por ingeniería genética mediante la clonación de genes que codifican proteínas inmunogénicas.

– Vacunas de subunidades peptídicas formadas por epítopes específicos de proteínas microbianas. Para esto debe contener la secuencia que se une a las proteínas CPH I y II, para su presentación y reconocimiento.

– Otras como vacunas de anticuerpos antiidiotipo, moléculas coadyuvantes y vacunas de ADN.

Principios Microscópicos

Microscopía de Campo Brillante

– La muestra se visualiza por transiluminación, dejando pasar la luz a través del condensador hacia la muestra. Luego la imagen se aumenta a través del lente objetivo y luego por los lentes oculares.

– Se usan objetivos de 10x, 40x y 100x.

– La limitación es la resolución de la imagen, es decir la capacidad de distinguir que dos objetos están separados y no son uno solo.

– El poder de resolución de un microscopio está determinado por la longitud de onda de la luz utilizada y el ángulo de incidencia de la luz en el lente objetivo. (llamada apertura numérica).

– El poder de resolución aumenta utilizando aceite de inmersión, ya que reduce la dispersión óptica.

– Los mejores microscopios de campo brillante tienen una resolución de hasta 0.2 µm.

Microscopía de Campo Oscuro

– Se usa el mismo microscopio, pero con un condensador especial que impide que la luz trasmitida ilumine directamente la muestra.

– Solo luz oblicua y diseminada alcanza la muestra, lo que hace que se vea iluminada brillantemente contra un fondo oscuro.

– Mejora considerablemente el poder de resolución del microscopio. Alcanza 0.02 µm.

– Especial para Treponema pallidum, Leptospira, Borrelia burgdorferi.

– No permite estudiar la estructura interna de los microorganismos.

Microscopia de Contraste de Fase

– Permite detectar los detalles internos del mo.

– Aquí la longitud de onda de un haz de luz sale de la fase en relación con el otro haz de luz, es decir, el haz que se mueve a través del material denso sufre un retraso mayor que el otro haz.

– Por medio del uso de anillos en el condensador y las lentes objetivo, las diferencias de fase se ven más brillante que la luz fuera de fase. Crea una imagen tridimensional, permite análisis de estructuras internas.

Principios y Aplicaciones Microscópicos

– La microscopía se utiliza principalmente para dos funciones:

• La detección inicial de microorganismos.
• La identificación preliminar o definitiva de los mismos.

Tipos de Tinciones Microscópicas

• Examen directo
• Tinciones diferenciales
• Tinciones acidorresistentes
• Tinciones fluorescentes

Examen Directo

• Ex. Fresco: Preparación no teñida, examinada con microscopía de campo brillante, de campo oscuro o contraste de fases.
• KOH al 10%: Se usa para disolver el material proteico y facilita la detección de elementos fúngicos. Se pueden agregar pigmentos para aumentar el contraste.
• Tinta china: Modificación del anterior, usando tinta china. Usado especialmente para Cryptococcus en LCR. La cápsula no se tiñe.
• Yodo de Lugol: Se agrega yodo a las preparaciones húmedas de muestras parasitológicas para reforzar el contraste de las estructuras internas. Facilita la diferenciación entre amebas y leucocitos.

Tinciones Diferenciales

• Tinción de Gram: La más usada. Permite separar los grandes grupos de bacterias (G+, G-). Después de la fijación de la muestra a un portaobjetos, se expone a cristal violeta y después se agrega yodo para formar un complejo con pigmento principal. Durante la decoloración con alcohol o acetona, las bact. G+ retienen el complejo, mientras que las G- lo pierden, se añade safranina como contracolorante, que es retenido por los G-. El grado en que cada microorganismo retiene la tinción depende del mismo, las condiciones de cultivo y la habilidad del microscopista.
• Tinción de hematoxilina férrica: Utilizada para detección e identificación de protozoos fecales. Los huevos y larvas de helmintos retienen la tinción, permitiendo su clara identificación.
• Tinción de azul O de toluidina: Se usa para detectar Pneumocystis en muestras respiratorias.
• Tinción tricrómica: Alternativa a la hematoxilina férrica para teñir protozoos.
• Tinción de Wright-Giemsa: Se usa para detectar parásitos sanguíneos, cuerpos de inclusión de virus y clamidias. Es una tinción policromática que contiene azul de metileno, azur B y eosina Y.
• Tinción de Wright-Giemsa: Se usa para detectar parásitos sanguíneos, cuerpos de inclusión de virus y clamidias. Es una tinción policromática que contiene azul de metileno, azur B y eosina Y.
• La tinción Giemsa combina azul de metileno y eosina. Los iones de eosina están cargados negativamente y tiñen los componentes básicos de las células de color entre naranja y rosa, mientras que otros pigmentos tiñen las estructuras celulares ácidas en tonos de azul y violeta. Los trofozoitos de los protozoos tienen núcleos rojos y citoplasmas azulverdoso. Las levaduras se tiñen de azul. Pneumocystis y clamidias se tiñen de violeta.

Tinciones Acidorresistentes

• Tinción de Ziehl-Neelsen: Se utiliza para micobacterias. Se tiñen con carbolfucsina básica y resisten la decoloración con soluciones ácido-base. El fondo se tiñe para contrastar con azul de metileno. Los microorganismos se ven rojos sobre fondo azul. La captación de la carbolfucsina requiere el calentamiento de la muestra.
• Tinción de Kinyoun: Ídem pero en frío.
• Tinción acidorresistente modificada: Para microorganismos que se tiñen más débilmente con esta técnica. Ej: Nocardia, Cryptosporum, otros.

Tinciones Fluorescentes

• Tinción naranja de acridina: Se utiliza para detección de bacterias y hongos en muestras clínicas. El pigmento se intercala en el ácido nucleico. Con pH neutro las bacterias, hongos y material celular se tiñen de naranja rojizo. Con pH ácido las bacterias y hongos se tiñen de color naranja rojizo, pero el fondo se tiñe amarillo verdoso.
• Tinción directa con anticuerpos fluorescentes: Se acoplan anticuerpos (mono o policlonales), con moléculas fluorescentes. La unión específica a un microorganismo es detectada por la presencia de fluoresceína microbiana. Es útil en detectar microorganismos como Streptococcus pyogenes, Bordetella, Legionella, Chlamydia, Pneumocystis, virus de la gripe, virus herpes simple. La sensibilidad y especificidad de la prueba están determinadas por el número de microorganismos presentes en la muestra y la calidad de los anticuerpos utilizados en los reactivos.