Introducción

Antes de manipular muestras para el diagnóstico de protozoos hemáticos, es crucial tomar precauciones para garantizar la seguridad del personal de laboratorio. Estas precauciones incluyen:

• Usar prendas protectoras como guantes, batas y gafas.
• Cubrir cualquier herida expuesta.
• Utilizar agujas y lancetas desechables y desecharlas en un contenedor especial.
• Lavarse las manos después de manipular las muestras.

El tiempo transcurrido entre la obtención de la muestra y su manipulación es crucial, especialmente si se sospecha malaria o babesiosis. La parasitemia puede variar, por lo que se recomienda realizar varios frotis durante 2-3 días, preferiblemente entre las 8-12 horas.

Tipos de Muestras de Sangre

Sangre venosa: Contiene el material necesario para la mayoría de las técnicas de diagnóstico. Sin embargo, en casos como la malaria, los anticoagulantes pueden alterar la morfología del parásito, por lo que se prefiere la sangre capilar.

Sangre capilar: Se utiliza cuando los anticoagulantes pueden afectar la morfología del parásito. Es importante obtener la muestra sin comprimir la herida.

Se recomienda preparar dos frotis, uno grueso y uno fino, tanto para sangre capilar como venosa.

Frotis Grueso

El frotis grueso contiene una capa gruesa de hematíes, lo que permite una detección más sensible de los parásitos. Sin embargo, no permite un examen detallado de la morfología del parásito. Se prepara extendiendo 2-3 gotas de sangre en un círculo de 2 cm de diámetro. Si no se van a teñir, se recomienda lisar los hematíes y secarlos.

Frotis Fino

El frotis fino contiene una sola capa de células sanguíneas, lo que facilita la observación de la morfología del parásito. Es útil para la identificación del parásito una vez detectado en el frotis grueso.

Concentración de la Sangre

Procedimiento:

1. Obtener sangre con oxalato o citrato y colocarla en un tubo de Wintrobe.
2. Centrifugar la muestra.
3. Extraer las células de la capa leucoplaquetaria con un tubo capilar delgado.
4. Preparar frotis delgados, secarlos y teñirlos con Giemsa.
5. Para buscar tripanosomas, extender el material sobre un portaobjetos, colocar un cubreobjetos y evaluar la presencia de tripomastigotas móviles.

Microscopía

Examen de Frotis Gruesos

El examen de frotis gruesos es útil para la detección rápida de parasitosis hemática e infecciones mixtas. Pasos:

1. Visualizar todo el frotis con bajo aumento.
2. Observar con un aumento de 100x y seleccionar un área teñida con suficientes glóbulos blancos (alrededor de 20).
3. Si se observan parásitos, establecer una propuesta de la especie para confirmarla con el frotis fino.
4. Si no se encuentran parásitos (NPF), la OMS recomienda examinar 100 campos visuales, cada uno con 20 glóbulos blancos, para concluir que el frotis grueso es negativo.

En pacientes inmunodeprimidos, los síntomas de malaria pueden presentarse con menos parásitos, por lo que se recomienda observar más campos visuales.

Examen de Frotis Fino

El examen de frotis finos es útil para la identificación del parásito detectado en el frotis grueso o para la búsqueda de parásitos si no se dispone de un frotis grueso. Pasos:

1. Observar con bajo aumento.
2. Examinar el frotis con un objetivo de 100x por lo menos 300 campos visuales.

Cuantificación de Parásitos

La cuantificación de parásitos proporciona información útil en algunos casos. Los parásitos que causan malaria se cuantifican comparando su número con el de células sanguíneas como los glóbulos rojos o blancos.

Glóbulos Rojos (RBCs)

Contabilizar los hematíes parasitados en 500-2000 hematíes del frotis fino y expresar el resultado como porcentaje de parasitemia. Si la parasitemia es alta, contabilizar 500 hematíes; si es baja, contabilizar un mínimo de 2000 hematíes. Contabilizar las fases asexuales y los gametocitos por separado.

Glóbulos Blancos (WBCs)

En frotis gruesos, contabilizar hasta encontrar 500 parásitos o 1000 WBCs. Expresar el resultado como parásitos por microlitro de sangre, utilizando el recuento de glóbulos blancos concreto si se conoce, o asumiendo que hay 8000 WBCs por microlitro de sangre.

Tinciones Fluorescentes

Las tinciones fluorescentes tiñen ácidos nucleicos y se utilizan para la identificación de parásitos sanguíneos. La técnica de Kawamoto utiliza naranja de acridina para teñir los frotis, que luego se examinan en un microscopio de fluorescencia. Esta técnica proporciona una tinción diferencial del ADN nuclear (verde) y del ARN citoplasmático (rojo), lo que permite el reconocimiento del parásito. Se aplica en la detección de Plasmodium y T. Brucei.